熒光定量pcr儀的選購要領(lǐng)
發(fā)布時(shí)間：2017-09-14 閱讀：996次
要想購到適合的儀器，先要清楚儀器的各個(gè)組合部分。熒光定量pcr儀主要由溫控模塊、檢測(cè)器、光路傳導(dǎo)、光源組成。
一、溫控模塊/Peltier：
普通的Peltier加熱方式具有明顯邊緣效應(yīng)，均一性差，是上一代的模塊PCR加熱技術(shù)，正處于被淘汰的邊緣。
目前的溫控模塊：銀，在金屬中銀的導(dǎo)熱性能較高，升降溫速度快，孔間溫度均一性好，邊緣效應(yīng)相應(yīng)減少金屬的熱傳導(dǎo)系數(shù)表： 銀 429 ＞銅 401 ＞ 金 317 ＞鋁 237 ＞鐵 80 ＞錫 67 ＞ 鉛 34.8
另：?jiǎn)我荒K升降溫速度高并不代表樣本升降溫速度也高，因此在溫控模塊升降溫速度對(duì)比中，終是要看樣本的升降溫速度是否快大升降溫速度不等與平均升降溫速度。
二、檢測(cè)器：
熒光定量pcr儀靈敏度：冷CCD ＞CCD ＞光電倍增管 CPM ＞光電二管
CCD作為熒光信號(hào)的接受器，其質(zhì)量直接決定了儀器的檢測(cè)靈敏度和穩(wěn)定性。
10℃的冷CCD，和常溫CCD有著質(zhì)的區(qū)別，在專業(yè)光學(xué)領(lǐng)域，冷CCD的造價(jià)成本至少要比常規(guī)CCD高出一倍以上。冷CCD在低的溫度下進(jìn)行光信號(hào)捕捉，能夠提供高的光感靈敏度和低背景噪音。因此，有的熒光定量PCR能夠穩(wěn)定區(qū)分1000和2000拷貝的濃度差異，而有的只能做到區(qū)分5000和10000個(gè)拷貝數(shù)。
三、光路傳導(dǎo)：
光路的傳導(dǎo) 光路設(shè)計(jì)應(yīng)盡可能有效消除邊緣效應(yīng)，光路設(shè)計(jì)是否有效消除邊緣效應(yīng)，只有實(shí)驗(yàn)才能檢驗(yàn)。檢驗(yàn)方法：96/384孔板中及四角各布置標(biāo)準(zhǔn)品，看差異。其中
a、光源直接照射微孔板上：邊緣效應(yīng)明顯
b、逐孔移動(dòng)式采光：無邊緣效應(yīng)，但需時(shí)常校正
c、散射采光：邊緣效應(yīng)較明顯，切換光源時(shí)需要光源組件移動(dòng)
四、光源：
熒光定量pcr儀光強(qiáng)比較：髙強(qiáng)度白光LED ＞ 鹵鎢燈 ＞單色LED
白光LED的亮度約是鹵鎢燈的3倍左右，單色LED的10倍左右，能夠捕捉到多的熒光信號(hào)，是專業(yè)光源領(lǐng)域的新技術(shù)代表，2011年開始普遍應(yīng)用于專業(yè)儀器，無論光強(qiáng)、靈敏度與均一性可與上一代氙燈光源媲美，且壽命提升了10倍以上。鎢燈燈絲本身存在閃爍不穩(wěn)定的問題，其激發(fā)能量遠(yuǎn)低于白光LED，事實(shí)上，無需高端品牌汽車的旗艦概念車，如豐田雷克薩斯，已經(jīng)開始使用白光LED作為車頭燈。
壽命比較：髙強(qiáng)度白光LED = 單色LED ＞鹵鎢燈
白光LED的壽命長(zhǎng)達(dá)10000小時(shí)以上，一般可以使用5-10年左右，基本上超過了一般科研儀器的正常工作壽命，基本終身無需換光源，而鹵鎢燈光源基本每2年就要換一次，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，南方是不足一年就要換一次。另：鹵鎢燈每次運(yùn)行需要半小時(shí)預(yù)熱，其中累計(jì)散發(fā)的熱量對(duì)熒光具有明顯的淬滅作用。
上述，便是熒光定量pcr儀的選購要領(lǐng)，供大家借鑒參考，希望對(duì)大家有所幫助。
一、溫控模塊/Peltier：
普通的Peltier加熱方式具有明顯邊緣效應(yīng)，均一性差，是上一代的模塊PCR加熱技術(shù)，正處于被淘汰的邊緣。
目前的溫控模塊：銀，在金屬中銀的導(dǎo)熱性能較高，升降溫速度快，孔間溫度均一性好，邊緣效應(yīng)相應(yīng)減少金屬的熱傳導(dǎo)系數(shù)表： 銀 429 ＞銅 401 ＞ 金 317 ＞鋁 237 ＞鐵 80 ＞錫 67 ＞ 鉛 34.8
另：?jiǎn)我荒K升降溫速度高并不代表樣本升降溫速度也高，因此在溫控模塊升降溫速度對(duì)比中，終是要看樣本的升降溫速度是否快大升降溫速度不等與平均升降溫速度。
二、檢測(cè)器：
熒光定量pcr儀靈敏度：冷CCD ＞CCD ＞光電倍增管 CPM ＞光電二管
CCD作為熒光信號(hào)的接受器，其質(zhì)量直接決定了儀器的檢測(cè)靈敏度和穩(wěn)定性。
10℃的冷CCD，和常溫CCD有著質(zhì)的區(qū)別，在專業(yè)光學(xué)領(lǐng)域，冷CCD的造價(jià)成本至少要比常規(guī)CCD高出一倍以上。冷CCD在低的溫度下進(jìn)行光信號(hào)捕捉，能夠提供高的光感靈敏度和低背景噪音。因此，有的熒光定量PCR能夠穩(wěn)定區(qū)分1000和2000拷貝的濃度差異，而有的只能做到區(qū)分5000和10000個(gè)拷貝數(shù)。
三、光路傳導(dǎo)：
光路的傳導(dǎo) 光路設(shè)計(jì)應(yīng)盡可能有效消除邊緣效應(yīng)，光路設(shè)計(jì)是否有效消除邊緣效應(yīng)，只有實(shí)驗(yàn)才能檢驗(yàn)。檢驗(yàn)方法：96/384孔板中及四角各布置標(biāo)準(zhǔn)品，看差異。其中
a、光源直接照射微孔板上：邊緣效應(yīng)明顯
b、逐孔移動(dòng)式采光：無邊緣效應(yīng)，但需時(shí)常校正
c、散射采光：邊緣效應(yīng)較明顯，切換光源時(shí)需要光源組件移動(dòng)
四、光源：
熒光定量pcr儀光強(qiáng)比較：髙強(qiáng)度白光LED ＞ 鹵鎢燈 ＞單色LED
白光LED的亮度約是鹵鎢燈的3倍左右，單色LED的10倍左右，能夠捕捉到多的熒光信號(hào)，是專業(yè)光源領(lǐng)域的新技術(shù)代表，2011年開始普遍應(yīng)用于專業(yè)儀器，無論光強(qiáng)、靈敏度與均一性可與上一代氙燈光源媲美，且壽命提升了10倍以上。鎢燈燈絲本身存在閃爍不穩(wěn)定的問題，其激發(fā)能量遠(yuǎn)低于白光LED，事實(shí)上，無需高端品牌汽車的旗艦概念車，如豐田雷克薩斯，已經(jīng)開始使用白光LED作為車頭燈。
壽命比較：髙強(qiáng)度白光LED = 單色LED ＞鹵鎢燈
白光LED的壽命長(zhǎng)達(dá)10000小時(shí)以上，一般可以使用5-10年左右，基本上超過了一般科研儀器的正常工作壽命，基本終身無需換光源，而鹵鎢燈光源基本每2年就要換一次，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，南方是不足一年就要換一次。另：鹵鎢燈每次運(yùn)行需要半小時(shí)預(yù)熱，其中累計(jì)散發(fā)的熱量對(duì)熒光具有明顯的淬滅作用。
上述，便是熒光定量pcr儀的選購要領(lǐng)，供大家借鑒參考，希望對(duì)大家有所幫助。
