DNA凝膠成像的安全打開方式
發(fā)布時間：2019-02-14 閱讀：1264次
瓊脂糖凝膠電泳分離技術(shù)是分子生物學(xué)實驗室進行分離、鑒定和提純DNA片段常用的方法。通過在制膠時摻入或制膠后染色的方式，使熒光染料結(jié)合在DNA分子上，在特定光源的照射下便可確定DNA分子的位置。
早期，用于DNA瓊脂糖凝膠染色的染料多為EB（溴化乙錠），EB可以嵌入到DNA分子堿基對之間，在紫外光的激發(fā)下發(fā)出強的熒光。EB由于其靈敏度高、穩(wěn)定，而廣受歡迎。但由于EB為強誘變劑，具有高致癌性，實驗者在操作EB時往往“提心吊膽”。后期，EB逐漸被一些EB替代物如GoldView、GelRed、Gelsafe等所替代，此類替代物雖然毒性明顯比EB降低，但大部分仍還是采用紫外光激發(fā)，實驗操作者在觀察凝膠尤其是切膠時還是會暴露在紫外下。我們知道紫外線照射，會導(dǎo)致基因突變，人體長時間接受紫外線的照射甚至?xí)T發(fā)皮膚癌。
有沒有什么既安果又好的方法？有！那就是藍光成像
藍光成像，顧名思議，采用藍光作為激發(fā)光源，所使用的與DNA結(jié)合的染料其佳激發(fā)波長在藍光波段。下面就讓小編給大家安利一下藍光成像的好處。
安全
常見的藍光染料，其致突變性遠低于EB數(shù)倍甚至數(shù)十倍。且此類染料佳激發(fā)波長多是在400-500nm的可見光，檢測時采用可見藍光激發(fā)，整個凝膠檢測或回收過程中操作者無需暴露在紫外下， 避免紫外對人體損傷的可能。
靈敏
常見的藍光染料至少可檢測出20pg~50pg DNA，檢測核酸的靈敏度比EB染色法平均高10倍左右。SYBR Green I至少可檢出20pg DNA， 靈敏度比EB染色法高10至25倍。
不會造成DNA損傷
紫外光會造成核酸突變、缺刻等，影響下游的PCR擴增效率、產(chǎn)物回收、連接轉(zhuǎn)化效率（某公司曾做過實驗，將1.25 kb的基因片段在紫外光下暴露2分鐘，再切膠回收、連接、轉(zhuǎn)化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)平板上的克隆數(shù)幾乎為零）、RT-PCR擴增效率等。藍光作為一種可見光對DNA樣品無任何損傷，不會影響下游實驗。
