非洲豬瘟檢測PCR實驗室的設計原則
發布時間：2019-07-22 閱讀：1553次
PCR實驗室原則上為試劑準備區、樣品制備區、擴增區和擴增產物分析區四個單獨的工作區域并設有專用走廊，各工作區域應設緩沖間，工作區與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區應是分隔的，各工作區有明顯的標志，不能直通，如果緊密相連，需安裝物品傳遞窗。前兩區為擴增前區，后兩區為擴增后區，擴增前區與擴增后區應嚴格分開。實驗材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等，只能從擴增前區流向擴增后區，即從試劑準備區→樣品制備區→擴增區→擴增產物分析區，不得逆向流動。實驗室的氣流也應從擴增前區流向擴增后區，不得逆向流動。各工作區頂部應安裝紫外燈，紫外燈的波長為254nm，每20㎡一支40W的紫外燈。
非洲豬瘟檢測PCR實驗室的設計原則：
1、非洲豬瘟檢測實驗室的選址
符合檢測實驗室的相關規定，具體適用于屠宰場來說，可選擇辦公樓或者的實驗室空間，選址不能和屠宰線相通，如果實驗室陽性對照污染，會污染整個屠宰生產線，勢必對屠宰場造成巨大的經濟損失。
個別不專業的實驗室設計建造公司因為不了解非洲豬瘟檢測實驗室的檢測流程，造成設計布局不合理，對后期開展工作造成很大的不便及生物安全隱患。
2、主體結構
目前實驗室的主體多為彩鋼板、鋁合金型材。室內所有陰角、陽角均采用鋁合金R50內角鋁，從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。并且彩鋼板結構牢固，線條簡明，美觀大方，密封性好。
3、標準的四區分隔和氣壓調節
將PCR過程分成試劑準備、標本制備和PCR擴增區及產物分析檢測區四個的實驗區。整個區域有一個整體緩沖走廊。每個實驗區設置有緩沖區，同時各區通過氣壓調節，使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產物對人員和環境的污染。
另外：
PCR實驗室根據使用儀器的功能合理設置各個工作區域，如采用聚合酶聯反應：則設置試劑儲存和準備區、標本制備區、擴增區、擴增產物分析區四個單獨的工作區域，這是常用的分區方式。樣品需要粉碎處理的，還需增設樣品粉碎區；若使用實時熒光PCR法：基因擴增區、基因產物分析區可以合并在一個房間內；采用標本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的全自動化PCR分析儀，則標本制備區、擴增區、擴增產物分析區可合并為一個區域，因此PCR實驗室原則上設置五個區或四個區或三個區或二個單獨的工作區。
核酸擴增前區和核酸擴增后區可設在一個房間內，但必須在滿足下列要求的前提下：
a.核酸擴增前區實驗室內設置兩個不同位置的實驗區，試劑配置在超凈工作臺中操作，樣品處理在生物安全柜內操作。
b.在核酸擴增后區使用全封閉的擴增和檢測系統，如實時熒光PCR儀等。
c.每個實驗人員使用各自的試劑、耗材、移液器和盛放污染物的盛器。
d.在實驗前后對操作區域和共享器具進行清潔及消毒。
e.各區域的試劑、器具、儀器和設備為該區專用，不得交叉使用。
4、非洲豬瘟檢測實驗室的布局
非洲豬瘟檢測實驗室用的儀器為熒光定量PCR，因此核酸擴增和分析在一個區，實驗室設計需要如下功能房間：PCR緩存走廊、帶緩存間的配液室、帶緩存間的樣品處理室、帶緩存間的核酸擴增分析區及實驗室用具消毒室。
5、非洲豬瘟檢測實驗室生物安全保護
理論上講非洲豬瘟檢測實驗室是BSL-2生物安全實驗室，需要配置二級生物安全柜，推薦選擇70%外排，30%內循環，各功能房間緩存設置衣柜和消毒器，各區的實驗服專用，物料流通需要配置帶紫外線的互鎖的傳遞窗，實行人流物流分開設置。
6、非洲豬瘟檢測實驗室消毒
在三個實驗區和三個緩沖區頂部以及傳送窗內部安裝有紫外燈，供消毒用。
在試劑準備區和標本制備區還設置移動紫外線燈，對實驗桌進行局部消毒。
7、非洲豬瘟檢測實驗室機械連鎖不銹鋼傳遞窗
試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼（不建議使用電子連鎖方式）傳遞窗傳遞，保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染（人物分流）。
8、非洲豬瘟檢測實驗室地面
地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面，整體性好。便于進行清掃，耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面，或大塊的瓷磚（至少800mm×800mm）接縫需要小于2mm。
9、非洲豬瘟檢測實驗室照明
燈具要選用凈化燈具，能達到便于清洗、不積塵的特點。
驗室各區功能及主要設備
1、試劑準備區：主要進行試劑的制備、分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區，不得經過其它區域。試劑原材料必須貯存在本區內，并在本區內制備成所需的試劑。本區主要設備有天平、冰箱、離心機、加樣器、振蕩器等。
對于氣流壓力的控制，本區并沒有嚴格的要求。
2、樣品制備區：主要進行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區主要設備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴等。
本區的壓力梯度要求為：相對于鄰近區域為正壓，以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。
3、擴增區：主要進行DNA擴增。此外，已制備的DNA模板 (來自樣品制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑準備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。本區主要設備有：擴增儀、冰箱、離心機、加樣器等。
本區的壓力梯度要求為：相對于鄰近區域為負壓，以避免氣溶膠從本區漏出。
4、擴增產物分析區：擴增產物的測定。本區主要設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等。
本區的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區域為負壓，以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。
非洲豬瘟檢測PCR實驗室的設計原則：
1、非洲豬瘟檢測實驗室的選址
符合檢測實驗室的相關規定，具體適用于屠宰場來說，可選擇辦公樓或者的實驗室空間，選址不能和屠宰線相通，如果實驗室陽性對照污染，會污染整個屠宰生產線，勢必對屠宰場造成巨大的經濟損失。
個別不專業的實驗室設計建造公司因為不了解非洲豬瘟檢測實驗室的檢測流程，造成設計布局不合理，對后期開展工作造成很大的不便及生物安全隱患。
2、主體結構
目前實驗室的主體多為彩鋼板、鋁合金型材。室內所有陰角、陽角均采用鋁合金R50內角鋁，從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。并且彩鋼板結構牢固，線條簡明，美觀大方，密封性好。
3、標準的四區分隔和氣壓調節
將PCR過程分成試劑準備、標本制備和PCR擴增區及產物分析檢測區四個的實驗區。整個區域有一個整體緩沖走廊。每個實驗區設置有緩沖區，同時各區通過氣壓調節，使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產物對人員和環境的污染。
另外：
PCR實驗室根據使用儀器的功能合理設置各個工作區域，如采用聚合酶聯反應：則設置試劑儲存和準備區、標本制備區、擴增區、擴增產物分析區四個單獨的工作區域，這是常用的分區方式。樣品需要粉碎處理的，還需增設樣品粉碎區；若使用實時熒光PCR法：基因擴增區、基因產物分析區可以合并在一個房間內；采用標本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的全自動化PCR分析儀，則標本制備區、擴增區、擴增產物分析區可合并為一個區域，因此PCR實驗室原則上設置五個區或四個區或三個區或二個單獨的工作區。
核酸擴增前區和核酸擴增后區可設在一個房間內，但必須在滿足下列要求的前提下：
a.核酸擴增前區實驗室內設置兩個不同位置的實驗區，試劑配置在超凈工作臺中操作，樣品處理在生物安全柜內操作。
b.在核酸擴增后區使用全封閉的擴增和檢測系統，如實時熒光PCR儀等。
c.每個實驗人員使用各自的試劑、耗材、移液器和盛放污染物的盛器。
d.在實驗前后對操作區域和共享器具進行清潔及消毒。
e.各區域的試劑、器具、儀器和設備為該區專用，不得交叉使用。
4、非洲豬瘟檢測實驗室的布局
非洲豬瘟檢測實驗室用的儀器為熒光定量PCR，因此核酸擴增和分析在一個區，實驗室設計需要如下功能房間：PCR緩存走廊、帶緩存間的配液室、帶緩存間的樣品處理室、帶緩存間的核酸擴增分析區及實驗室用具消毒室。
5、非洲豬瘟檢測實驗室生物安全保護
理論上講非洲豬瘟檢測實驗室是BSL-2生物安全實驗室，需要配置二級生物安全柜，推薦選擇70%外排，30%內循環，各功能房間緩存設置衣柜和消毒器，各區的實驗服專用，物料流通需要配置帶紫外線的互鎖的傳遞窗，實行人流物流分開設置。
6、非洲豬瘟檢測實驗室消毒
在三個實驗區和三個緩沖區頂部以及傳送窗內部安裝有紫外燈，供消毒用。
在試劑準備區和標本制備區還設置移動紫外線燈，對實驗桌進行局部消毒。
7、非洲豬瘟檢測實驗室機械連鎖不銹鋼傳遞窗
試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼（不建議使用電子連鎖方式）傳遞窗傳遞，保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染（人物分流）。
8、非洲豬瘟檢測實驗室地面
地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面，整體性好。便于進行清掃，耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面，或大塊的瓷磚（至少800mm×800mm）接縫需要小于2mm。
9、非洲豬瘟檢測實驗室照明
燈具要選用凈化燈具，能達到便于清洗、不積塵的特點。
驗室各區功能及主要設備
1、試劑準備區：主要進行試劑的制備、分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區，不得經過其它區域。試劑原材料必須貯存在本區內，并在本區內制備成所需的試劑。本區主要設備有天平、冰箱、離心機、加樣器、振蕩器等。
對于氣流壓力的控制，本區并沒有嚴格的要求。
2、樣品制備區：主要進行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區主要設備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴等。
本區的壓力梯度要求為：相對于鄰近區域為正壓，以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。
3、擴增區：主要進行DNA擴增。此外，已制備的DNA模板 (來自樣品制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑準備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。本區主要設備有：擴增儀、冰箱、離心機、加樣器等。
本區的壓力梯度要求為：相對于鄰近區域為負壓，以避免氣溶膠從本區漏出。
4、擴增產物分析區：擴增產物的測定。本區主要設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等。
本區的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區域為負壓，以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。
