恒溫金屬浴操作方法及常見問題對策
發布時間：2014-01-13 閱讀：619次
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1.變性溫度與時間PCR反應中模板DNA的變性十分重要。只有完全性的模板DNA和PCR產物雙鏈完全解開，才能有效的和引物結合。這種結合是PCR擴增的基礎。變性溫度越高，時間越長變性就越充分。
但溫度過高、時間過長又會影響Taq DNA聚合酶的活性，所以通常選用變性溫度為95℃30s為宜。在PCR反應中個循環變性重要，需時間較長，因模板DNA的鏈比較長。
2．復性溫度與時間變性溫度是PCR反應成敗的關鍵，復性溫度決定著PCR的特異性。溫度越低復性越好，但是容易出現引物與靶DNA的錯配，增加非特異性結合，溫度太高不利于復性，大多數PCR反應的復性溫度在55℃左右。確定了復性溫度后，復性時間并不是關鍵因素。但復性時間太長會增加非特異的復性。
