雞抗非洲豬瘟病毒抗體檢測
發布時間：2019-06-24 閱讀：1441次
由于市場上沒有銷售雞抗豬抗體檢測試劑盒，所以實驗室只有自建ELISA檢測方法，通過對包被液、封閉液、待檢樣品濃度、酶標抗體濃度、顯色時間等條件的摸索，確定佳條件，同時做了特異性檢測。確定判定標準為OD450nm≧0.826時判定為陽性。
步驟：
1、全病毒用包被液稀釋以佳濃度包被酶標板，100uL/孔，4℃過夜。
2、拿出包被的酶標板回復室溫，棄包被液，280uL/孔 PBST洗滌3次，每次3min，拍干。
3、加入合適的封閉液，100uL/孔，37℃封閉1h，拍干。
4、待檢測樣品用抗體液稀釋到佳濃度，100uL/孔，37℃孵育1h，洗滌3次，拍干。
5、HRP-兔抗雞 二抗，用抗體稀釋液按佳濃度稀釋，100uL/孔，37℃孵育45min，洗滌3次，拍干。
6、用TMB顯色試劑盒，按說明依次加入溶液A，溶液B，室溫避光反應。
步驟：
1、全病毒用包被液稀釋以佳濃度包被酶標板，100uL/孔，4℃過夜。
2、拿出包被的酶標板回復室溫，棄包被液，280uL/孔 PBST洗滌3次，每次3min，拍干。
3、加入合適的封閉液，100uL/孔，37℃封閉1h，拍干。
4、待檢測樣品用抗體液稀釋到佳濃度，100uL/孔，37℃孵育1h，洗滌3次，拍干。
5、HRP-兔抗雞 二抗，用抗體稀釋液按佳濃度稀釋，100uL/孔，37℃孵育45min，洗滌3次，拍干。
6、用TMB顯色試劑盒，按說明依次加入溶液A，溶液B，室溫避光反應。
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