基因擴增儀的基因組DNA的提取及擴增技術
發布時間：2014-08-28 閱讀：766次
摘要：基因擴增儀的基因組DNA的提取及擴增技術，下面小編給詳細介紹。
、基因擴增儀的基因組DNA的提取
1.實驗目的
基因組DNA的制備是基因分析的前提。 本實驗要求掌握基因組DNA提取的基本方法。實驗原理 DNA在生物體內是與蛋白質形成復合物的形式存在的。核酸與蛋白質之間的結合力包括離子鍵、氫鍵、范德華力等，破壞或降低這些結合力就可把核酸與蛋白分開。 DNA、RNA所含有的嘌呤環和嘧啶環的共軛雙鍵具有吸收紫外光的性質，吸收高峰在260nm處，所以，可用紫外分光光度法測定DNA的濃度。
2.基因組DNA提取試劑盒：
在高鹽的狀態下，DNA純化樹脂專一性地吸附DNA；而在低鹽或水溶液狀態下，DNA被洗脫下來。
第二、基因擴增儀PCR擴增技術
1.實驗目的
本實驗以所提出的全血基因組DNA為模板，以線粒體基因上一段核苷酸為引物，擴增出924bp的擴增產物。學習并掌握PCR反應的基本原理與實驗技術。實驗原理 多聚酶鏈反應技術的原理類似于DNA的天然復制過程。
2.可簡述為： 在微量離心管中加入適量緩沖液，加入微量模板DNA，四種脫氧核苷酸，和耐熱Taq聚合酶及兩個合成的DNA引物，并有Mg2+存在。 加熱使模板DNA在高溫下變性，雙鏈解鏈，這是所謂變性階段。 降低溶液溫度，使合成引物在低溫與模板DNA互補退火形成部分雙鏈，這是所謂退火階段。 溶液反應溫度升至中溫，在Taq酶作用下，以四種dNTP為原料，引物為復制起點，模板DNA的一條雙鏈在解鏈和退火之后延伸為兩條雙鏈，這是延伸階段。
第三、基因擴增儀如何正確維護保養
1.PCR儀基因擴增儀需要定期檢測，視制冷方式而定一般半年至少一次。
2.PCR反應的要求溫度與實際分布的反應溫度是不一致的，當檢測發現各孔平均溫度差偏離設置溫度大于1—2℃時，可以運用溫度修正法糾正PCR實際反應溫度差。
3.當然PCR反應過程的關鍵是升、降溫過程的時間控制，要求越短越好，當PCR儀的降溫過程超過60s，就應該檢查儀器的制冷系統，對風冷制冷的PCR儀要較徹底地清理反應底座的灰塵；對其他制冷系統應檢查相關的制冷部件。
